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Curso Práctico PCR Tiempo Real hands-on

Lunes 20 Mayo 2019

On Science

Curso Práctico PCR Tiempo Real hands-on

inicio de la parte online: 20 de mayo
Parte presencial: 21 a 23 de junio

40+16 horas · online + fin de semana
Parque Tecnológico de Madrid. Tres Cantos

Inscripción | Más información

RESUMEN

Durante un fin de semana intensivo haces con nosotros tus propios experimentos de PCR a tiempo real de cuantificación absoluta, cuantificación relativa y genotipado, y así puedes resolver todas las dudas o cuestiones que tengas. Previamente, durante cuatro semanas, trabajamos en el aula virtual (plataforma online) adquiriendo la teoría, visualizando cada paso a través de tutoriales, tanto del diseño experimental como del análisis de resultados, y realizando ejercicios in silico reales, para diseñar tu propio experimento y analizar los resultados.

OBJETIVOS

  • Cuantificar cantidades de microorganismos en aguas, alimentos, muestras biológicas…
  • Determinar carga viral.
  • Determinar número de copias de un gen.
  • Comprobar cómo afecta un medicamento a la expresión de genes de interés: con importantes aplicaciones en cáncer, procesos de desarrollo, etc.
  • En general, analizar la expresión diferencial de genes en cualquier organismo: procariotas, animales, plantas, hongos, etc.
  • Determinar la presencia de transgénicos en alimentos o cultivos.
  • Genotipado: análisis de polimorfismos en cualquier especie.
  • Uso de sondas Taq Man (sondas de hidrólisis): ventajas y limitaciones.
  • Tecnología de agentes intercalantes: ventajas y limitaciones.
  • Diseñar experimentos de PCR a tiempo real para: cuantificación absoluta, cuantificación relativa, genotipado.
  • Analizar papers en lo que se haya utilizado PCR a tiempo real.
  • Interpretar gráficas de fluorescencia.
  • Detectar errores de diseño y solventarlos.
  • Comprobar si los resultados de un experimento son fiables.
  • Validar primers: comprobar su eficiencia y su especificidad en nuestro sistema.
  • Montar placas de PCR a tiempo real.
  • Identificar zonas en un laboratorio de PCR a tiempo real y condiciones necesarias para los procedimientos
  • Montar un laboratorio de PCR a tiempo real.
  • Resolver cuestiones de manejo experimental, entrenar las técnicas “in lab”

TEMARIO

Conceptos teóricos

  • PCR clásica vs. PCR a tiempo real.
  • La PCR a tiempo real: tipos y aplicaciones.
  • Fluorescencia y fluoróforos.
  • Cuantificación absoluta: bases de la cuantificación absoluta y diseño experimental.
  • PCR digital.
  • Cuantificación relativa: bases de la cuantificación relativa y diseño experimental.
  • Validación de primers: especificidad y eficiencia.
  • El método ΔΔCt.
  • Genotipado: polimorfismos, SNPs, discriminación alélica y diseño experimental.
  • Genotipado por High Resolution Melting.

Prácticas in silico

  • Diseño experimental para cuantificación absoluta por PCR a tiempo real. Plantilla y condiciones de amplificación.
  • Análisis de alimentos contaminados por Staphylococcus aureus por PCR a tiempo real.
  • El método ΔΔCt: Diseño experimental para expresión diferencial de genes.
  • Búsqueda de marcadores tumorales para análisis diferencial entre lipoma y liposarcoma.
  • Genotipado por PCR a tiempo real. Diseño de plantilla y condiciones de amplificación y análisis de gráficas.
  • Determinación de susceptibilidad genética a celiaquía por discriminación alélica.

Prácticas experimentales (Hands-On)

  • Organización de un laboratorio de biología molecular para PCR a tiempo real: identificación de zonas de trabajo.
  • Preparación de mix, diluciones estándar, y otros reactivos de PCR.
  • Extracción de ácidos nucleicos a partir de muestras de cada alumno.
  • Preparación y montaje de placas de PCR a tiempo real.
  • Determinación de la carga viral de VIH por cuantificación de virus.
  • Análisis de expresión de genes de desarrollo en plantas.
  • Genotipado de genes respuesta inmune a partir del ADN de los alumnos.

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